污水处理-蛋白质分离纯化工艺

亲和色谱法（亲和色谱法）是分离蛋白质的一种非常有效的方法。通常只需要一个步骤就可以从高纯度的复杂蛋白质混合物中分离出某些要纯化的蛋白质。此方法基于某些蛋白质与另一种称为配体的分子特异性结合但不能共价结合的能力。基本原理：蛋白质以复杂混合物的形式存在于组织或细胞中，每种细胞都包含数千种不同的蛋白质。因此，蛋白质的分离，纯化和表征是生物化学的重要组成部分，没有一种或一套现成的方法可以从复杂的蛋白质混合物中提取任何种类的蛋白质，因此经常使用几种方法。组合。

一、根据蛋白质分子大小的差异进行分离的方法

1.透析和超滤

透析方法使用半透膜来分离不同分子大小的蛋白质。

超滤方法使用高压或离心力迫使水和其他小溶质分子通过半透膜，而蛋白质保留在膜上。您可以选择不同的孔径来截获分子量不同的蛋白质。

2.凝胶过滤法

也称为尺寸排阻色谱法或分子筛色谱法，这是基于分子大小分离蛋白质混合物的有效方法之一。柱中常用的填料是葡萄糖凝胶（Sephadex ged）和琼脂糖凝胶（琼脂糖凝胶）。

二、根据蛋白质的带电特性进行分离

蛋白质在不同的pH环境中具有不同的带电特性和不同的电荷量，可以将其分离。

1.电泳

在相同的pH条件下，由于蛋白质的分子量不同和电场中的电荷不同，因此可以分离出各种蛋白质。值得注意的是等电聚焦电泳，它使用两性电解质作为载体。在电泳过程中，两性电解质形成一个pH梯度，从正电极到负电极逐渐增加。当某种带电荷的蛋白质在其中游动时，它将到达各个点。电点的pH位置停止，此方法可用于分析和制备各种蛋白质。

2.离子交换色谱

离子交换剂包括阳离子交换剂（例如羧甲基纤维素； CM-纤维素）和阴离子交换剂（二乙基氨基乙基纤维素；纤维素）。当分离出的蛋白质溶液流过离子交换色谱时。在色谱柱中，与离子交换剂带相反电荷的蛋白质被吸附在离子交换剂上，然后通过改变pH或离子强度来洗脱吸附的蛋白质。

3.根据蛋白质溶解度的不同分离方法

中性盐对蛋白质的溶解度有重要影响。通常，在低盐浓度下随着盐浓度的增加，蛋白质的溶解度增加，这称为盐溶解。当盐浓度持续增加时，蛋白质的溶解度将不同程度地降低，并依次发生这种现象。将大量盐添加到蛋白质溶液中。高浓度的盐离子（如硫酸铵的SO4和NH4）具有很强的水合能力，可以带走蛋白质分子的水合层，形成“水的损失”，使蛋白质胶体凝结并沉淀出来。如果在盐析过程中溶液的pH值处于蛋白质的等电点，则效果会更好。由于各种蛋白质分子的粒径和亲水性不同，盐析所需的盐浓度也不同。因此，调节混合蛋白质溶液中的中性盐浓度可以使各种蛋白质分阶段沉淀。